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1、真空手套箱分为主箱体和过渡室两部分。主箱体不能抽真空，过渡室则可以单独抽真空。
　　2、先将手套套入手套孔上,再用喉箍将其固定,如果条件允许,最后在手套的外围加一圈与喉箍相同宽度的橡胶圈(或片),这样可以防止手套被勒破,延长手套的使用寿命。
　　3、将实验所需用的仪器及设备从过渡室放置并转移到主箱体内,较大设备需要从主箱体开门的一侧放入,另外放入适量的实验样品用作箱体环境的测试。
　　4、在主箱体充气结束后,即主箱体达到了实验所需环境,关闭主箱体进出气口,打开过渡室外门,将实验所用材料放入过渡室后关闭外门,以达到和主箱体相同的实验环境。
　　5、此时打开过渡室内门,将过渡室内的实验材料取放到主箱体内,开始实验操作.操作时关闭过渡室内门。
　　6、实验结束后先打开过渡室内门,将实验结束后的材料放入过渡室,关闭过渡室内门,然后打开过渡室外门,将实验材料取出.关闭过渡室外门,实验操作结束。
　　7、关闭主箱体,过渡室所有开门及阀门,将惰性气体瓶接入手套箱进气阀门,先打开手套箱主箱体进气阀门,然后缓缓打开惰性气体瓶阀门,慢慢往主箱体内充气,此时根据手套的鼓涨程度还确定是否需要打开手套箱另一侧的排气孔,此时可以试着将手套带在手套往箱体内挤压,由于这种方法一两次内可能无法达到实验所需要的环境,所以建议多重复几次,期间可以实验样品来测试是否达到了实验所需要的环境。